考研:生物常見問題
來源:易賢網 閱讀:1779 次 日期:2017-04-07 16:11:58
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1.在重蒸酚中為什么加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇?

保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解DNA,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。

2.如何將不同構型的質粒DNA區(qū)別開?

由于不同構型的DNA在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率不同,ccc DNA的泳動速度最快,通過凝膠電泳方法可將不同構型的DNA區(qū)別開。

3.用酚-氯仿抽提細胞基因組DNA時,通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇,為什么?

異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產生。另外,異戊醇有助于分相,使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩(wěn)定。

4.用乙醇沉淀DNA時,為什么加入單價的陽離子?

用乙醇沉淀DNA時,通常要在溶液中加入單價的陽離子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的負電荷,減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,而易于聚集沉淀。

5.在提取RNA時經常使用異硫氰酸胍,有什么作用?

RNA是一種極易降解的核酸分子。高濃度強變性劑異硫氰酸胍使細胞結構迅速被破壞,使RNA從細胞中釋放出來。同時高濃度異硫氰酸胍還使細胞內的RNA酶失活,使釋放出的RNA不被降解。

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